ScheBo^® • Brainostic™ GFAP ELISA Kit

Vorteile

• Sehr sensitiver Nachweis von BSE-Risikomaterial (Ausschlussgrenze: 0,1 % ZNS in Fleischprodukten)
• Hochspezifische immunochemische Detektion von ZNS
• Risikomaterial kann aus Extrakten aller Fleischerzeugnisse, Wurstwaren (Roh-, Brüh- und Kochwürste) und von Abstrichtupfern (Nachweis von mit Risikomaterial kontaminierter Oberflächen und Schlachtkörpern) in einem Testansatz nachgewiesen werden
• Keine falsch positiven Ergebnisse durch Kreuzreaktion mit Blut
• Speziesunabhängiges Screening von BSE-Risikomaterial

Methode

• ELISA
• Nachweis von ZNS mit Hilfe der sauren Gliafaserprotein (GFAP) als Markerprotein
• 1 Blank, 4 Standards, 1 Kontrolle in Doppelbestimmung

Testprinzip

Die ELISA-Platte ist mit einem polyklonalen Antikörper, der saures Gliafaserprotein (GFAP) erkennt, beschichtet. GFAP aus Proben der Fleischerzeugnisse, Wurstwaren und von kontaminierten Oberflächen bzw. Standards wird durch Bindung am Antikörper immobilisiert. Anschließend erfolgt eine Inkubation mit Peroxidase-markierten Antikörpern gegen GFAP. Während des nächsten Inkubationsschritts oxidiert die Peroxidase das TMB (3,3’5,5’-Tetraµmethyl-benzidin)-Substrat. Oxidiertes TMB wird anschließend photo-metrisch bestimmt.

Messbereich

Der Testkit erlaubt die GFAP-Bestimmung im Messbereich von 0,1% bis 1,0% ZNS. Werte unterhalb des niedrigsten Standards sollten als nicht nachweisbar angegeben werden. Werte oberhalb des höchsten Standards sollten als > 1,0% angegeben werden.

Pr?zision

Die Intraassay-Varianz wurde durch zehnfache Bestimmung von 4 Proben (0,1-1,0% ZNS) ermittelt. Der mittlere Variationskoeffizient (VK) lag bei 5,9% (2,6-8,6%).
Die Interassay-Varianz wurde anhand von 4 Proben (0,1-1,0% ZNS), die an zehn verschiedenen Tagen bestimmt wurden, berechnet. Der mittlere VK lag bei 9,2% (4,6-13,2%).

Probenmaterial

• Fleischerzeugnisse, z.B. Rohwürste
• Erhitzte Fleischerzeugnisse
• Wurstwaren
• Hackfleisch
• Fleischhaltige Lebensmittel
• Abstrichtupfer

Die Stabilität der Proben ist durch ihr Mindesthaltbarkeitsdatum festgelegt. Abstrichtupfer sind zwei Tage bei Raumtemperatur bzw. 5 Tage bei 4°C haltbar. Lagerung bei -20°C erhöht die Haltbarkeitsdauer. Die Extrakte der Wurstwaren sind 2 Tage bei 4°C haltbar.

Kurzanleitung für den routinierten Anwender

Wichtig: Die Kurzanleitung ersetzt nicht die ausführliche und detaillierte Testanleitung!

• Vorbereitung des Proben-/Waschpuffers
• Proben mit Extraktionspuffer homogenisieren/extrahieren
• Probenextrakt in Proben-/Waschpuffer verdünnen
• je 50 µl Blank, Standards (gebrauchsfertig), Kontrolle (gebrauchsfertig) und verdünnte Proben als Doppelbestimmung in ELISA-Platte pipettieren
• 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren
• Waschen
• je 50 µl GFAP-POD (gebrauchsfertig)
• 15 Minuten bei Raumtemperatur im Dunkeln inkubieren
• Waschen
• 100 µl Substratlösung (gebrauchsfertig)
• 5 Minuten bei Raumtemperatur im Dunkeln inkubieren
• Zugabe von 100 µl Stopplösung (gebrauchsfertig)
• Extinktionsbestimmung bei OD 450 oder OD 450 - OD 620
• Auswertung mittels lin-lin Standardkurve